PCR實(shí)驗(yàn)室污染？別急，教你萬(wàn)能應(yīng)急法
發(fā)布日期：2022-04-08
核心提示：PCR檢測(cè)因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過(guò)正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假
PCR檢測(cè)因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過(guò)正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，因此所有的預(yù)防措施都會(huì)稍稍有所不同�！敢撞椴灰撞臁梗廴緛�(lái)的悄無(wú)聲息，我們?cè)撊绾螒?yīng)對(duì)。
那么，如何避免以及處理實(shí)驗(yàn)室污染，對(duì)PCR人來(lái)說(shuō)是一門(mén)必修課。
PCR 實(shí)驗(yàn)室污染分類(lèi)
主要是在采（取）樣的過(guò)程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過(guò)程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。這是 PCR 反應(yīng)中最主要最常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。還有一種容易被忽視的污染，是能造成PCR產(chǎn)物污染形式的氣溶膠污染，而氣溶膠造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。
在實(shí)驗(yàn)操作中會(huì)經(jīng)常用到陽(yáng)性參考品，這些參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成的，質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。
(1).購(gòu)買(mǎi)噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；
(2).購(gòu)買(mǎi)市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配置不同濃度的消毒液，或者購(gòu)買(mǎi)成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；(3).購(gòu)買(mǎi)核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀釋100倍)；
(1).清理廢液缸并且對(duì)廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；(2).用有效氯含量為2000mg/L消毒水對(duì)移液槍進(jìn)行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；
(3).將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時(shí)后，用清水沖洗干凈晾干后使用；
(4).對(duì)污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動(dòng)提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理；對(duì)生物安全柜等含有空氣過(guò)濾系統(tǒng)的設(shè)備，需更換過(guò)濾網(wǎng)；
(5).用有效氯含量為500mg/L的消毒液對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室（地板、墻面、天花板、門(mén)、窗戶等地方）進(jìn)行清潔，并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行噴霧消毒（重點(diǎn)部位為操作區(qū)），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的核酸污染；同時(shí)加大通風(fēng)量（內(nèi)循環(huán)無(wú)用，盡可能外循環(huán)）；
(6).待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后，常用設(shè)備和操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車(chē)近距離輻照1小時(shí)；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。
以上措施每日進(jìn)行，直至污染消除；步驟(1)-(6)必須堅(jiān)持每天進(jìn)行，確保消除實(shí)驗(yàn)室污染；
設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組，根據(jù)陰性對(duì)照確認(rèn)污染情況�？墒褂贸ㄩ_(kāi)后隔夜放置操作區(qū)的陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證)，若連續(xù)三天陰性對(duì)照沒(méi)有起跳，則說(shuō)明污染得到控制，可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。
污染，是 PCR 實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性、結(jié)果不可信、研發(fā)不可靠的重要推手。在最初開(kāi)展PCR實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，應(yīng)最大程度的降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)及日常實(shí)驗(yàn)室管理和操作中，就需要進(jìn)行合理的規(guī)劃以及嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室SOP，把污染的可能性扼殺在搖籃中。
編輯：songjiajie2010
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