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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)室里常見(jiàn)的一種分析儀器，用于測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在一定波長(zhǎng)照射下所產(chǎn)生的吸光 度的大小，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。在平時(shí)的日常教學(xué)及到企業(yè)調(diào)研時(shí)，發(fā)現(xiàn)在分光光度計(jì)使用問(wèn)題上，使用者多多少少都存在一些疑惑或使用不規(guī)范的問(wèn)題，下面就常見(jiàn)的一些問(wèn)題進(jìn)行討論。
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關(guān)于儀器的預(yù)熱問(wèn)題在一般分光光度計(jì)的使用說(shuō)明書(shū)上，要求儀器預(yù)熱時(shí)間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計(jì)，開(kāi)機(jī)后儀器自動(dòng)進(jìn)入自檢 (初始化 )狀態(tài)，約需1O分鐘左右。在分光光度計(jì)預(yù)熱這個(gè)環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問(wèn)題，如開(kāi)機(jī)只預(yù)熱電路系統(tǒng) (不調(diào)節(jié)波長(zhǎng)、打開(kāi)吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過(guò)程就是預(yù)熱等等。
對(duì)帶微處理器有自檢功能的分光光度計(jì)，開(kāi)機(jī)后儀器自檢 (初始化)結(jié)束后，在測(cè)定窗口上，設(shè)置所需波長(zhǎng)值， 用一個(gè)吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào) “0000A”后，預(yù)熱 儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進(jìn)行測(cè)定。
對(duì)于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，由于有雙光源 (鎢燈與氘燈)， 為了延長(zhǎng)燈的使用壽命，開(kāi)機(jī)自檢完成后可以關(guān)掉測(cè)定時(shí)不用的光源燈。
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關(guān)于波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查與校正日常在使用分光光度計(jì)時(shí)，是否要經(jīng)常進(jìn)行儀器波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查 ?答案是否定的。當(dāng)在日常測(cè)定中發(fā)現(xiàn)儀器測(cè)定靈敏度下降，這時(shí)才應(yīng)進(jìn)行波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查，最簡(jiǎn)易的檢查方法 (粗檢 )是：儀器開(kāi)機(jī)后，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)為 580nm，在吸收池座的通光道中插入一張白色卡片紙，若能觀察到一長(zhǎng)方形 的黃色光斑，說(shuō)明波長(zhǎng)準(zhǔn)確度屬正常范圍，否則就應(yīng)進(jìn)行波 長(zhǎng)校正。
當(dāng)儀器經(jīng)過(guò)長(zhǎng)途搬運(yùn)、受過(guò)機(jī)械振動(dòng)或更換光源燈泡后， 必須進(jìn)行波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查與校正。粗檢同上，其校正方法 有：干涉濾光片或鐠釹濾光片校正法、利用氘燈的特征發(fā)射線校正法。具體步驟可參考儀器使用說(shuō)明書(shū)。
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關(guān)于吸收池的使用問(wèn)題按照吸收池使用的基本順序分說(shuō)如下：
(1)吸收池的潤(rùn)洗
吸收池裝液前必須用待裝溶液潤(rùn)洗 2～3遍，潤(rùn)洗前是否 要用純水先潤(rùn)洗一遍呢?這可看具體情況區(qū)別對(duì)待。
如果初次用干的吸收池裝待測(cè)液 (特別是有色溶液)時(shí)， 從維護(hù)保養(yǎng)吸收池的角度講，為減小其干玻面對(duì)顏色的吸附能力，便于用后吸收池的清洗，建議先用純水潤(rùn)洗一遍，再用待裝溶液潤(rùn)洗 2～3遍；若后再用此吸收池裝濃度相近或更高濃度的溶液 (如從小到大測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度)時(shí)， 可直接用待裝溶液潤(rùn)洗2～3遍即可。
標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量時(shí)，如果是先測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，當(dāng)測(cè)到樣品溶液時(shí)，由于測(cè)定的樣品溶液濃度比最后一 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度低或不可知時(shí)，建議先用純水潤(rùn)洗一遍， 再用待裝溶液潤(rùn)洗 2～3遍。
(2)吸收池的裝液、擦拭與放置 吸收池潤(rùn)洗完成后注入待測(cè)溶液至池高的 2/3~3/4處。
(3)吸收池成套性檢驗(yàn)及處理 新吸收池或吸收池使用一段時(shí)間后都必須進(jìn)行成套性檢驗(yàn).
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關(guān)于吸光度測(cè)定重復(fù)性的問(wèn)題分光光度計(jì)在測(cè)定過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)同一個(gè)溶液在不同時(shí)問(wèn)里其測(cè)定結(jié)果不同，即重復(fù)性不好，其原因是什么?排除測(cè)定錯(cuò)誤因素外，可 能原因有：
(1)儀器預(yù)熱時(shí)間不夠或預(yù)熱方法不對(duì)所造成，應(yīng)延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間或采用正確的預(yù)熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長(zhǎng)時(shí)間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)溶液的吸光度都 同樣變低，在相對(duì)定量時(shí)對(duì)結(jié)果影響很小。但是對(duì)這類儀器， 一 般建議連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 3h，若需長(zhǎng)時(shí)間使用，最好間歇 30min 。
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其他問(wèn)題(1)發(fā)現(xiàn)測(cè)定過(guò)程中的一些不良操作不利于儀器的維護(hù)、保養(yǎng)，使用者應(yīng)盡 可能避免。如在儀器的上方進(jìn)行操作(如倒溶液)；拿出來(lái)的吸收池 (或吸收池架)放在儀器的面 板上；同實(shí)驗(yàn)室不同儀器的吸收池混用等。
(2)關(guān)于防塵、防潮問(wèn)題
儀器一般都隨機(jī)附有一只塑料布罩，不使用時(shí)用其罩住整個(gè)儀器，這是很好的防塵手段。但發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室里不用附來(lái)塑料布罩，而是 自己用一塊普通布或做成布罩來(lái)覆蓋儀 器，防塵效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入數(shù)袋防潮硅膠，也能更好起到延長(zhǎng)防潮的功效。在防潮時(shí)， 如果儀器設(shè)有防潮干燥筒的，應(yīng)經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)變色立即更 換新的或加以烘干再用。
長(zhǎng)期停用的分光光度計(jì)，要定期開(kāi)機(jī)除潮，如每隔一個(gè) 月通電預(yù)熱半小時(shí)，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元件的性能 。
