在日常檢測中,大多數的細菌、放線菌、霉菌培養法均為需氧培養。培養基接種微生物后放于35 ℃~37 ℃或25℃恒溫培養箱(或水浴箱)中,培養18 h-24h或3d-5d,大多數菌能達到指數期,可以進行計數及鑒定。需氧培養法按培養基的狀態來分,可分為三類。
一、固體培養法
固體培養法是指將微生物接種在固體培養基上生長繁殖的方法,固體培養基包括瓊脂平板和瓊脂斜面。瓊脂平板用于菌落計數和分離菌落,瓊脂斜面用于微生物形態觀察或保藏,接種后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生長的菌體上),堆疊(一般不超過6個平皿)放于培養箱中,培養皿之間和培養皿距離箱壁至少要25 mm,保證空氣循環,這時,對各個點的溫度要進行驗證。為防止培養基過分干燥,可用塑料袋松散的包一下,也可以在培養箱內放一杯水防止培養基干癟。斜面試管放于試管架上,然后放置于培養箱中進行培養。除此兩種方法屬固體培養法外,還有以下幾種。
(一)插片培養法
(1)用高壓滅菌后冷卻到50℃左右的培養基制備平板,凝固后用接種環挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過菌的蓋玻片以450斜插入固體培養基中,緊靠接種物,使菌體沿蓋玻片生長,置28 ℃~32 ℃培養箱培養3d-5 d。
(3)培養完畢后,取出蓋玻片放在載玻片上,直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長個體形態。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍水溶液,再放上插片,用高倍鏡觀察孢子結構。
(二)載玻片培養法
(1)在培養皿底部鋪一張圓形濾紙,濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架,其上放一塊干凈的載玻片和兩片蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包扎,高壓滅菌后,烘干備用。
(2)將經過高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養基,倒入另外的無菌培養皿中制成2mm厚的平板,凝固后用無菌刀切成1cm2的方塊,放置于載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上霉菌孢子,而后蓋上蓋玻片,壓緊瓊脂塊,在濾紙上加2 ml -3 ml。無菌水或20%無菌甘油,保濕培養,培養好后,可直接用低倍鏡觀察
(三)透析膜培養法
透析膜浸在試管中高壓滅菌后,用無菌的鑷子取出后平鋪在瓊脂平板上,在膜上用接種工具點接上菌種,蓋好皿蓋后,進行培養。也可直接把透析膜放在液體培養基里浸泡后,直接鋪在平皿中,滅菌后進行點種微生物,再蓋上皿蓋進行培養。
(四)其他
應用在釀造工業上的培養瓶培養,盤曲、簾子曲培養,厚層通風培養。
二、液體培養法
液體培養法是利用液體培養基對微生物進行培養的方法,可分為靜止培養法和深層培養法。
(一)靜止培養法
靜止培養法是指在接種后培養液靜止不動進行培養。一般包括試管法和三角瓶淺層培養法,培養時盛液體培養基的螺口瓶或螺口試管的蓋不要擰緊,松散蓋上即可,放于試管架上,然后放置于培養箱或水浴鍋中進行培養。在靜置狀態下,三角瓶內的通氣狀況與其中的裝液量和瓶口棉塞的通氣程度對瓶內微生物的生長速度和生長量有很大的關系。一般情況下,接種量越大,培養時間越長,生長量越高。剛接種的時候,菌體需適應培養基環境,故繁殖較慢,然后進入快速生長期,生長速度呈指數增長,到一定數量后,培養基的營養成分消耗殆盡,次生產物增多,菌體生長速度減緩。
(二)通氣深層培養法
1.振蕩(搖瓶)培養法
此法最早是荷蘭人A. J. Kluyver等在1933年使用,即將三角瓶內培養液用8層紗布包住瓶口,以取代一般的棉花塞,同時降低瓶內的裝液量,把它放置于搖床上有節奏的振蕩,以該法提高液體溶氧量的目的。
該法可以對微生物進行通氣深層培養,通過對細菌、酵母等單細胞微生物振蕩培養,可以得到均一的菌懸液,常用于菌種的選育及生化試驗和發酵試驗等。
振蕩培養的設備有恒溫搖床、搖瓶機等,培養瓶放在里面后,進行振蕩培養,瓶口用6層~8層的紗布包扎,瓶內液體不宜過多,防止濺到瓶塞上引起污染。
2.發酵罐培養法
可進行較大液體量的通氣培養,有小型發酵罐和大型的發酵罐,小型的發酵罐一般為1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能夠提供培養微生物的營養和氧氣,并且有自動控制和記錄裝置。
三、半固體培養法
利用半固體培養基進行培養的方法,半固體培養基含有一定的瓊脂(0.02%-0.3% ),使培養基有一定的黏度,但沒有完全固化。培養時,盛半固體培養基的試管放置于試管架上,然后置于培養箱中進行培養。一般用于生化試驗。
一、固體培養法
固體培養法是指將微生物接種在固體培養基上生長繁殖的方法,固體培養基包括瓊脂平板和瓊脂斜面。瓊脂平板用于菌落計數和分離菌落,瓊脂斜面用于微生物形態觀察或保藏,接種后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生長的菌體上),堆疊(一般不超過6個平皿)放于培養箱中,培養皿之間和培養皿距離箱壁至少要25 mm,保證空氣循環,這時,對各個點的溫度要進行驗證。為防止培養基過分干燥,可用塑料袋松散的包一下,也可以在培養箱內放一杯水防止培養基干癟。斜面試管放于試管架上,然后放置于培養箱中進行培養。除此兩種方法屬固體培養法外,還有以下幾種。
(一)插片培養法
(1)用高壓滅菌后冷卻到50℃左右的培養基制備平板,凝固后用接種環挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過菌的蓋玻片以450斜插入固體培養基中,緊靠接種物,使菌體沿蓋玻片生長,置28 ℃~32 ℃培養箱培養3d-5 d。
(3)培養完畢后,取出蓋玻片放在載玻片上,直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長個體形態。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍水溶液,再放上插片,用高倍鏡觀察孢子結構。
(二)載玻片培養法
(1)在培養皿底部鋪一張圓形濾紙,濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架,其上放一塊干凈的載玻片和兩片蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包扎,高壓滅菌后,烘干備用。
(2)將經過高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養基,倒入另外的無菌培養皿中制成2mm厚的平板,凝固后用無菌刀切成1cm2的方塊,放置于載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上霉菌孢子,而后蓋上蓋玻片,壓緊瓊脂塊,在濾紙上加2 ml -3 ml。無菌水或20%無菌甘油,保濕培養,培養好后,可直接用低倍鏡觀察
(三)透析膜培養法
透析膜浸在試管中高壓滅菌后,用無菌的鑷子取出后平鋪在瓊脂平板上,在膜上用接種工具點接上菌種,蓋好皿蓋后,進行培養。也可直接把透析膜放在液體培養基里浸泡后,直接鋪在平皿中,滅菌后進行點種微生物,再蓋上皿蓋進行培養。
(四)其他
應用在釀造工業上的培養瓶培養,盤曲、簾子曲培養,厚層通風培養。
二、液體培養法
液體培養法是利用液體培養基對微生物進行培養的方法,可分為靜止培養法和深層培養法。
(一)靜止培養法
靜止培養法是指在接種后培養液靜止不動進行培養。一般包括試管法和三角瓶淺層培養法,培養時盛液體培養基的螺口瓶或螺口試管的蓋不要擰緊,松散蓋上即可,放于試管架上,然后放置于培養箱或水浴鍋中進行培養。在靜置狀態下,三角瓶內的通氣狀況與其中的裝液量和瓶口棉塞的通氣程度對瓶內微生物的生長速度和生長量有很大的關系。一般情況下,接種量越大,培養時間越長,生長量越高。剛接種的時候,菌體需適應培養基環境,故繁殖較慢,然后進入快速生長期,生長速度呈指數增長,到一定數量后,培養基的營養成分消耗殆盡,次生產物增多,菌體生長速度減緩。
(二)通氣深層培養法
1.振蕩(搖瓶)培養法
此法最早是荷蘭人A. J. Kluyver等在1933年使用,即將三角瓶內培養液用8層紗布包住瓶口,以取代一般的棉花塞,同時降低瓶內的裝液量,把它放置于搖床上有節奏的振蕩,以該法提高液體溶氧量的目的。
該法可以對微生物進行通氣深層培養,通過對細菌、酵母等單細胞微生物振蕩培養,可以得到均一的菌懸液,常用于菌種的選育及生化試驗和發酵試驗等。
振蕩培養的設備有恒溫搖床、搖瓶機等,培養瓶放在里面后,進行振蕩培養,瓶口用6層~8層的紗布包扎,瓶內液體不宜過多,防止濺到瓶塞上引起污染。
2.發酵罐培養法
可進行較大液體量的通氣培養,有小型發酵罐和大型的發酵罐,小型的發酵罐一般為1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能夠提供培養微生物的營養和氧氣,并且有自動控制和記錄裝置。
三、半固體培養法
利用半固體培養基進行培養的方法,半固體培養基含有一定的瓊脂(0.02%-0.3% ),使培養基有一定的黏度,但沒有完全固化。培養時,盛半固體培養基的試管放置于試管架上,然后置于培養箱中進行培養。一般用于生化試驗。