固定方法有物理固定和化學(xué)固定兩類，物理固定可采用空氣干燥（血涂片）、驟冷（在液氮中迅速冷凍）或微波固定等；化學(xué)固定有浸潤法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法適用于動物實(shí)驗(yàn)中對缺氧敏感的器官，如神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸等取材。

 

一、浸潤法

 

浸潤法是組織化學(xué)和免疫 組織化學(xué)常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。

 

預(yù)先需估計(jì)固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內(nèi)，在容器上標(biāo)記組別和取材時(shí)間。容器內(nèi)放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時(shí)辨認(rèn)。固定液的用量應(yīng)是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據(jù)所選固定液和組織類型而定。

 

若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色，應(yīng)在4℃短時(shí)間固定，固定時(shí)間長會導(dǎo)致酶活性減弱，甚至消失。

 

二、灌流固定法

 

此法是經(jīng)血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內(nèi)，使生活的細(xì)胞在原位及時(shí)迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內(nèi)繼續(xù)固定。

 

灌流固定時(shí)大動物多采用輸液方式，將固定液從一側(cè)頸總動脈或股動脈輸入，從另一側(cè)切開靜脈放血，輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異，即500―2000ml不等。

 

小動物多采用心臟主動脈灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深度麻醉情況下，打開胸腔，縱向切開心包膜，并用紗線在動脈弓下打一松結(jié)，然后用靜脈輸液針從左心室向主動脈方向刺人，針尖刺人后，隨即將紗線扎緊固定，勿使其移動，再將右心耳剪開放血。在灌注固定液前，先用含抗凝劑的37℃生理鹽水灌流，沖洗血管內(nèi)的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝劑常用肝素，劑量為40mg/L沖洗液。肝臟顏色由鮮紅變?yōu)闇\白色時(shí)，即可灌流固定液，灌注速度為5～10ml/min，應(yīng)在30分鐘內(nèi)結(jié)束灌注并取材，而后將組織浸入相同的固定液中1～3小時(shí)。灌流固定對組織結(jié)構(gòu)和酶活性保存較好。