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液體樣品可直接取原液進行檢驗；固體或者半固體則必須依據檢驗經驗，選取1-3個適宜稀釋度進行檢驗（一般樣品選取1:10,1:100,1:1000三個稀釋度進行檢驗。若遇到不常做的樣品，可適當延長稀釋度至1：10000甚至更大）。
分別吸取1mL滅菌生理鹽水到平皿中做空白對照，若空白有菌落生長則該實驗無效。
根據對樣品污染情況的估計，若樣品有表面蔓延生長的可能性，則待第一次傾注的瓊脂凝固后，可在表面再覆蓋一層瓊脂以避免菌落蔓延而難以計數。
本標準的難點在于菌落計數及計算。
1）菌落計數時，從低稀釋度的平板開始計數。若所有平板上的菌落數均小于30CFU，則需計數所有平板上的菌落數，但僅采用最接近30CFU的兩個平板的菌落數來計算最終菌落數。
2）當第一稀釋梯度一個板上菌落數高于30，另一個低于30，則依據標準應當以介于30-300之間的菌落數作為該稀釋梯度的菌落數。
3）若所有平板上的菌落數均大于30CFU，則只計數30-300CFU之間的平板上的菌落數，并采用這些數據，依據標準中給出的公式，進行最終菌落總數的計算，此時將大于300CFU的記為“多不可計”，以TNTC表示。
4）若所有稀釋度的平均菌落數都大于300，則不能所有都記為TNTC，必須將最高稀釋度的兩個平板上的菌落數逐一的計數，再計算平均數，該平均數為該梯度的菌落總數，其余平板上的菌落數可記為TNTC。
5）若所有平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數。
注意：對于該情況，一直存在爭議，不同的檢驗人員可能做法不一，有人保留為5CFU，有人保留為10CFU，并無固定做法，建議實驗室保持一貫做法，不要隨意更改。
