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在微生物檢測(cè)工作中，菌株是不可或缺的生物資源，用于各種質(zhì)量控制活動(dòng)，如培養(yǎng)基驗(yàn)收、試驗(yàn)對(duì)照、人員培訓(xùn)考核和方法確認(rèn)。菌株傳代是實(shí)驗(yàn)室中一個(gè)常見(jiàn)的話題。通過(guò)有效的傳代管理，可以確保菌株的質(zhì)量和穩(wěn)定性，進(jìn)而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。近幾天小編所在的微信交流群中，幾位業(yè)內(nèi)專(zhuān)家就“工作菌株能不能傳代”的問(wèn)題進(jìn)行了一些討論和知識(shí)分享，小編進(jìn)行了匯總，也搜集了一些資料，在這里分享給大家。先來(lái)看一下：菌株來(lái)源與代數(shù)管理相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求：
01 GB 4789.28-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求
直接從專(zhuān)業(yè)菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得并至少定義到屬或種水平的菌株。按菌株特性進(jìn)行分類(lèi)和描述,最好來(lái)源于食品,水或其生產(chǎn)環(huán)境中的菌株。
將標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)接一代后得到的一套完全相同的獨(dú)立菌株。
從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接一代獲得的獨(dú)立菌株。
由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品或標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株﹑儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接一代獲得的直接用于測(cè)試使用的菌株。 02 CNAS-CL01-A001：2022檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明
03 GB/T 27405-2008 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測(cè)
03 《中國(guó)藥典2020版》（四部）
這里的工作菌株不能傳代5次，指的是什么？工作菌株可以繼續(xù)傳代嗎？可能一些檢驗(yàn)員有時(shí)會(huì)感到困惑，為什么會(huì)有這樣的規(guī)定呢？
一是：為了防止菌株的突變。在培養(yǎng)中，菌株在傳代過(guò)程中往往會(huì)發(fā)生一些變異，這些變異可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 二是：工作菌株的來(lái)源方式、儲(chǔ)存方式都不足以保證其自身往下傳代的穩(wěn)定性。
工作菌株只能和其上一代的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株之間存在著代謝關(guān)系，工作菌株通常使用第三至第五代。 具體來(lái)說(shuō)就是第三代的工作標(biāo)準(zhǔn)菌株是從第二代的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株培養(yǎng)而來(lái)，第四代的工作標(biāo)準(zhǔn)菌株則由第三代的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株發(fā)展而來(lái)，第五代的工作標(biāo)準(zhǔn)菌株則由第四代的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株繁衍而來(lái)。 1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何形式的接種培養(yǎng)均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。 相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)中也已經(jīng)明確規(guī)定，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株才可以延續(xù)向下傳代，工作菌株不得進(jìn)行傳代。
工作菌株是從原種或參考原種中制備的，用于制備供試驗(yàn)用的接種物。 工作菌株不得用于制備參比菌株、參比菌種或原種菌株，或用于制備進(jìn)一步的工作菌株。
標(biāo)準(zhǔn)菌株：
標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株：
儲(chǔ)備菌株：
工作菌株：
9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則中對(duì)菌種有了較為明確的規(guī)定：
以上標(biāo)準(zhǔn)均提到菌株需要來(lái)源于官方保存機(jī)構(gòu)，且工作菌株傳代次數(shù)不能超過(guò)5代。
“工作菌株”不允許傳代，這是個(gè)基本原則。
關(guān)于這里的工作菌株不能傳代5次，具體指的是？
ISO 11133:2014：
原種培養(yǎng)物不得用于制備參比菌株或參比原種。
5.3.5 工作菌株
GB/T 27405-2008 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測(cè)附錄流程里有明確的規(guī)定：
總之，菌株傳代只能由上往下傳，儲(chǔ)備菌株可以做為工作菌株使用，但工作菌株不能做為儲(chǔ)備菌株使用，即如果儲(chǔ)備菌株作為工作菌株使用后，該株菌株使用后只能進(jìn)行銷(xiāo)毀，不可再進(jìn)行傳代保藏。
實(shí)驗(yàn)室使用的工作菌株一般不可超過(guò)第5代，除非標(biāo)準(zhǔn)方法中有明確要求，或?qū)嶒?yàn)室能夠證明菌株相關(guān)特性沒(méi)有改變。若在傳代過(guò)程中出現(xiàn)明顯變異，也不可繼續(xù)使用。
注：文章的觀點(diǎn)來(lái)自專(zhuān)家討論和小編的理解，僅供大家參考，如果有疑問(wèn)，歡迎大家留言探討。
