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一、定義雙層平板法，又叫雙層瓊脂平板法，顧名思義，兩層固體培養基的平板，具體是指由一個培養皿內倒入底層固體培養基和上層固體培養基形成的雙層平板，進行檢測噬菌體或其他抗性的過程就叫雙層平板法。
先在培養皿中倒入底層固體培養基，待其凝固后倒入含有檢測菌的上層培養基，經培養后，上層培養基會發生變化，比如說出現噬菌斑或抑菌圈或其他，以此來計算噬菌斑的數量，測定抗生素效價等。
上層培養基培養基：根據檢測菌種進行確定，滅菌后放入水浴鍋中，備用。比如說，檢測噬菌體，可以選用LB固體培養基。
(4)觀察，計算。
(3)試驗結束一定要將無關物品從超凈工作臺中取出，該滅菌的物品一定要滅菌后再處理，避免交叉污染。 (4)試驗過程中，盡量減少人員流動。 
二、原理
三、雙層平板法的應用1-噬菌體的分離培養
1.試驗詳細操作步驟
(1)配制底層培養基和上層培養基
底層培養基瓊脂粉含量：1.5%-2%。
底層培養基培養基：無菌水加1.5%-2%瓊脂粉，滅菌，待冷卻至50℃倒平板，凝固后備用。
上層培養基瓊脂粉含量：1%。
(2)傾倒上層培養基
一般情況，待測樣品為噬菌體污染的樣品。
①取培養基：取出上層培養基，冷卻至45℃左右。
②取樣品：用移液器取樣品0.5mL放入上層培養基中。
③取試驗菌：接著用移液器吸取大腸桿菌菌液0.2mL，也放入上層培養基中，沿壁搖勻。
④傾倒平板：將上述混合液快速倒入底層培養基上面，凝固。
(3)培養
上層培養基凝固后，放置于恒溫培養箱中倒置培養。
2.操作技巧：
(1)底層培養基不宜太厚，覆蓋培養皿底部即可。
太厚上層培養基無法倒入，太薄不能覆蓋培養皿底部，起不到應有的作用。
(2)上層培養基滅菌完成后，要搖勻放入水浴鍋中，間隔沿壁搖動。
經常搖動，培養基不容易出現結塊。
(3)水浴鍋溫度調至60℃，溫度不宜太高或太低。
溫度太高，想用的時候冷卻較慢；溫度太低，凝固的又太快。
(4)上層培養基溫度降至45℃左右，再加入污染菌液和試驗菌。
這個溫度既能保證培養基和菌液混勻，又能保證不凝固不結塊。
(5)上層培養基要沿壁搖勻，盡量避免產生氣泡。
氣泡太多，噬菌斑鋸齒狀，很難看。
(6)控制好試驗菌濃度。一般正好覆蓋一層菌液為好。
3.注意事項：
(1)酒精燈旁邊操作，時刻保持無菌意識。
(2)雙層平板法相對厚度不易把握，一定要看準，不能溢出或太厚。
